· polyacrylamideLe gel doit être composé d'un monomère d'acrylamide, d'un matériau de départ de polymérisation, d'un catalyseur et du mélange de sel et de tampon ensemble.
· acrylamideet BIS (N,N'-méthylène double acrylamide) est la matrice de gel sous forme de monomère.
· Le persulfate d'ammonium démarre le processus de polymérisation de l'adhésif.La formulation de la colle nécessite une solution de persulfate d'ammonium à 10% préparée dans l'eau.La plupart des informations indiquaient la nécessité d'une utilisation active.Cependant, la solution à 10% peut être placée à 4℃ pendant plusieurs semaines sans perte d'activité significative.Préparer jusqu'à 10 ml et jeter lorsque la colle ne parvient pas à s'agréger.
Astuce : Le pourcentage deacrylamidedans le séquençage, la colle et la colle protéique ne sont pas les mêmes.Si vous utilisez de l'acrylamide : solution BIS préfabriquée, assurez-vous d'avoir le bon flacon.
· TEMED (N, N, N', N'-tétraméthyléthylènediamine) est un catalyseur, en flacon marron, placé au réfrigérateur.Ajoutez juste avant de verser la colle.
· Le verre utilisé par électrophorèse en polyacrylamide en électrophorèse doit être lavé avant et après chaque fois.Après électrophorèse, laver avec une brosse douce et un chiffon dans de l'eau chaude savonneuse, rincer à l'eau distillée et laisser sécher.
· L'humidité et la poussière peuvent survenir avec le polymère creux.Avant l'électrophorèse, nettoyez la plaque de verre avec un nettoyant pour vitres et essuyez-la avec une brosse douce.Laver à l'eau distillée et sécher soigneusement avec une lingette en papier.Rincer avec de l'éthanol à 70 % avant d'essuyer avec du papier permet de nettoyer et d'accélérer le séchage.Ajouter successivement des échantillons d'acrylamide : BIS, eau, solution tampon, persulfate d'ammonium, TEMED.Bien agiter et verser immédiatement.
Il n'est pas nécessaire de dégazer le polyacrylamide avant polymérisation.(L'acrylamide était autrefois placée sous vide pour éliminer les bulles, car l'oxygène inhibe la polymérisation.)
Conseils d'échantillonnage pour points de colle horizontaux.
· Mettez un morceau de papier noir dans la boîte du bas, sur fond noir, pour faire un trou d'échantillon afin de voir plus clairement.
· Réservoir de colle rempli de tampon, juste au-dessus du colloïde.
· Si le bord a une lumière, allumez les lumières, laissez la lumière briller le colloïde.Aspirez l'échantillon dans la pipette.
· à l'aide d'un dispositif de pipetage automatique.
· dans 10 à 200 mu, 1 point mobile liquide peut être utilisé dans la plupart des points de l'échantillon.Pour les très petits trous d’échantillon (moins de 10 μ1), la longue tête de pipette utilisée pour séquencer la colle est plus pratique.
· pipeter juste immergé dans l'échantillon, en inhalant un fluide se déplaçant lentement.L'échantillon peut paraître collant à la glycérine et un pompage rapide peut attirer des bulles d'air dans la tête de la pipette.
· Les échantillons après avoir inhalé la tête de pipetage déplaceront doucement la tête fluide sur le bord du tuyau ou du papier d'essuyage aspirera la tête liquide à l'extérieur des gouttelettes.Faites attention à ne pas aspirer l'échantillon.
Placez l'échantillon dans le trou d'échantillon
· dispositif de pipetage pour maintenir un peu de pression, faire bouger légèrement les échantillons de la tête de liquide de débordement.
· la tête de pipetage insérée dans le tampon, légèrement plus haute que les trous des spots, maintient une pression positive.La pointe de la pipette peut être insérée dans un petit trou.
· lentement et régulièrement les échantillons.La pointe de la pipette est placée au-dessus du trou d’échantillon ponctuel et l’échantillon coulera dans le trou.Laissez l'échantillon couler pour remplir le trou d'échantillon au lieu de pousser.
· Une fois la dernière goutte d'échantillon avec la tête liquide, le liquide se déplacera vers la deuxième jambe, augmentera lentement le mouvement du liquide, sortira du tampon
Comment réaliser un prélèvement de colle vertical ?
· Trous d'échantillonnage de points de colle verticaux formés entre deux morceaux de verre.Dans une colle très fine, la tête de pipette ne peut même pas être insérée entre deux plaques de verre.Attention à la glycérine !Placez la tête de pipette sur le trou d'échantillon et l'échantillon coulera dans le trou.
· Échantillon ponctuel avant, assurez-vous de mettre le point vertical du trou d'échantillon de gel d'acyle de polypropylène est rincé.Laver l'acrylamide non polymérisé et l'eau qui peut apparaître au fond du trou d'échantillonnage.L'eau peut réduire considérablement le trou d'échantillonnage.Utilisez une seringue de 25 ml ou 50 ml et une aiguille de calibre 18.Versez le tampon d’électrophorèse et rincez soigneusement le trou d’échantillon.
· Il peut être difficile de voir le trou d'échantillonnage, mais en même temps, le reste est facile.S'il y a des trous excessifs, le tampon d'échantillon peut être testé avec du bleu de bromophénol.
Heure de publication : 31 mars 2023