· polyacrylamideLe gel doit être par monomère d'acrylamide, matériau de départ de la polymérisation, catalyseur et droit de mélange de sel et de tampon ensemble.
· acrylamideet bis (n, n '- méthylène double acrylamide) est la matrice de gel de forme monomère.
· Processus de polymérisation adhésive de démarrage de la persulfate d'ammonium. La formulation de la colle nécessite 10% de solution de persulfate d'ammonium préparée dans l'eau. La plupart des informations ont indiqué un besoin d'utilisation active. Cependant, la solution à 10% peut être placée à 4 ℃ pendant plusieurs semaines sans perte d'activité significative. Faire jusqu'à 10 ml et jeter lorsque la colle ne parvient pas à s'agréger.
Conseil: le pourcentage deacrylamideDans le séquençage de la colle et de la colle protéique n'est pas la même. Si vous utilisez une solution de l'acrylamide préalable: BIS, assurez-vous d'obtenir la bonne bouteille.
· TEMED (n, n, n ', n' - tétraméthyl éthylènediamine) est un catalyseur, dans une bouteille brun, placée au réfrigérateur. Ajoutez juste avant de verser de la colle.
· Polyacrylamide L'électrophorèse utilisée en verre dans l'électrophorèse doit être lavée avant et après chaque fois. Après électrophorèse, lavez avec une brosse douce et un chiffon dans de l'eau savonneuse chaude, rincez à l'eau distillée et tenez-vous à sécher.
· L'humidité et la poussière peuvent provoquer un polymère creux. Avant l'électrophorèse, nettoyez la plaque de verre avec un nettoyant en verre et essuyez-la avec une brosse douce. Lavez avec de l'eau distillée et séchez soigneusement avec une essuyage de papier. Le rinçage avec 70% d'éthanol avant d'essuyer avec du papier aide à nettoyer et à accélérer le séchage. Ajouter successivement des échantillons d'acrylamide: BIS, eau, solution tampon, persulfate d'ammonium, TEMED. Bien secouer et verser immédiatement.
Il n'est pas nécessaire de dégrader le polyacrylamide avant la polymérisation. (L'acrylamide était placé dans un vide pour éliminer les bulles car l'oxygène inhibe la polymérisation.)
Points d'échantillonnage du point de colle horizontal.
· Mettez un morceau de papier noir dans la boîte inférieure, fond noir pour faire un trou d'échantillon pour voir plus clairement.
· Tampon rempli de réservoir à colle, juste au-dessus du colloïde.
· Si le bord a une lumière, allumez les lumières, laissez la lumière brille de colloïd. Dessinez l'échantillon dans la pipette.
· Utilisation du dispositif de pipetage automatique.
· Dans le point de déménagement liquide 10-200 Mu 1 peut être utilisé dans la plupart des points de l'échantillon. Pour les trous d'échantillon très petits (moins de 10 μ1), la longue tête de pipette utilisée pour la colle de séquençage est plus pratique.
· Pipetage juste immergé dans l'échantillon, inhalant le fluide en mouvement lent. L'échantillon peut sembler collant avec la glycérine, et le pompage rapide peut entraîner des bulles d'air dans la tête de pipette.
· Les échantillons après inhalation de la tête de pipetage, déplaceront doucement la tête fluide sur le bord du tuyau ou le papier d'essuyage sucer la tête liquide à l'extérieur des gouttelettes. Faites attention à ne pas sucer l'échantillon.
Placer l'échantillon dans le trou d'échantillon
· Dispositif de pipetage pour maintenir un peu de pression, faites en sorte que les échantillons déplacent légèrement la tête de liquide déborde.
· La tête de pipetage insérée dans le tampon, légèrement supérieure à celle des trous de tache, maintiennent une pression positive. La pointe de la pipette peut être insérée dans un petit trou.
· Lentement et régulièrement les échantillons. La pointe de la pipette est placée au-dessus du trou d'échantillon de point et l'échantillon s'enfonce dans le trou. Laissez l'échantillon couler pour remplir le trou d'échantillon au lieu de pousser.
· Une fois la dernière goutte d'échantillon avec la tête liquide, le liquide se déplacera vers la deuxième étape, soulevez lentement le mouvement du liquide, sortez du tampon
Comment faire un échantillonnage vertical de colle?
· Point de colle vertical trous d'échantillon formé entre deux morceaux de verre. Dans une colle très mince, la tête de pipette ne peut même pas être insérée entre deux plaques de verre. Regardez la glycérine! Mettez la tête de pipette sur le trou d'échantillon et l'échantillon coulera dans le trou.
· Échantillon de points avant, assurez-vous de mettre le point vertical du trou d'échantillon de gel de polypropylène acyle est rincé. Laver l'acrylamide non polymérisé et l'eau qui peut apparaître au fond du trou d'échantillon. L'eau peut rendre le trou d'échantillon nettement plus petit. Utilisez une seringue de 25 ml ou 50 ml et une aiguille de calibre 18. Versez le tampon d'électrophorèse et rincez soigneusement le trou d'échantillon.
· Il peut être difficile de voir le trou d'échantillon, mais en même temps, le reste est facile. S'il y a des trous en excès, le tampon d'échantillon peut être testé avec du bleu bromophénol.
Heure du poste: MAR-31-2023