· polyacrylamideLe gel doit être composé d'un monomère d'acrylamide, d'un matériau de départ de polymérisation, d'un catalyseur et du mélange sel-tampon.
· acrylamideet le BIS (N, N'- méthylène double acrylamide) est la matrice de gel sous forme monomère.
· Le persulfate d'ammonium déclenche la polymérisation de l'adhésif. La formulation de la colle nécessite une solution aqueuse de persulfate d'ammonium à 10 %. La plupart des informations indiquent qu'une utilisation active est nécessaire. Cependant, la solution à 10 % peut être conservée à 4 °C pendant plusieurs semaines sans perte significative d'activité. Préparer jusqu'à 10 ml et jeter la colle si elle ne s'agglomère pas.
Astuce : Le pourcentage deacrylamideEn séquençage, la colle et la colle protéique sont différentes. Si vous utilisez une solution d'acrylamide-BIS préfabriquée, assurez-vous d'utiliser le flacon approprié.
· Le TEMED (N,N,N',N'-tétraméthyléthylènediamine) est un catalyseur, conditionné en flacon brun et placé au réfrigérateur. À ajouter juste avant de verser la colle.
· Le verre utilisé pour l'électrophorèse sur polyacrylamide doit être lavé avant et après chaque électrophorèse. Après l'électrophorèse, lavez-le avec une brosse douce et un chiffon à l'eau chaude savonneuse, rincez à l'eau distillée et laissez sécher.
· L'humidité et la poussière peuvent être présentes avec le polymère creux. Avant l'électrophorèse, nettoyer la plaque de verre avec un nettoyant pour vitres et l'essuyer avec une brosse douce. Laver à l'eau distillée et sécher soigneusement avec un chiffon en papier. Rincer à l'éthanol à 70 % avant d'essuyer avec du papier permet de nettoyer et d'accélérer le séchage. Ajouter successivement les échantillons d'acrylamide : BIS, eau, solution tampon, persulfate d'ammonium, TEMED. Bien agiter et verser immédiatement.
Il n'est pas nécessaire de dégazer le polyacrylamide avant la polymérisation. (Auparavant, l'acrylamide était placé sous vide pour éliminer les bulles, car l'oxygène inhibe la polymérisation.)
Conseils d'échantillons de points de colle horizontaux.
· mettre un morceau de papier noir dans la boîte du bas, fond noir pour faire un trou d'échantillon pour voir plus clairement.
· réservoir de colle rempli de tampon, juste au-dessus du colloïde.
· Si le bord est éclairé, allumez la lumière et laissez la lumière éclairer le colloïde. Aspirez l'échantillon dans la pipette.
· en utilisant un dispositif de pipetage automatique.
· Dans un liquide de 10 à 200 µl, le point mobile peut être utilisé pour la plupart des points de l'échantillon. Pour les très petits trous d'échantillon (moins de 10 µl), la longue tête de pipette utilisée pour le séquençage de la colle est plus pratique.
· Pipetage : immersion immédiate dans l'échantillon, inhalation lente du liquide. L'échantillon peut paraître collant à cause de la glycérine, et un pompage rapide peut entraîner des bulles d'air dans la tête de la pipette.
· Après avoir inhalé les échantillons, la tête de pipetage déplace doucement la tête de liquide sur le bord du tuyau ou aspire le liquide à l'aide d'un papier absorbant. Attention à ne pas aspirer l'échantillon.
Placez l'échantillon dans le trou d'échantillon
· dispositif de pipetage pour maintenir une petite pression, faire bouger légèrement les échantillons en débordant de la tête de liquide.
· La tête de pipetage insérée dans le tampon, légèrement au-dessus des trous, maintient une pression positive. L'embout de la pipette peut être inséré dans un petit trou.
· L'échantillon est prélevé lentement et régulièrement. La pointe de la pipette est placée au-dessus du trou d'échantillonnage et l'échantillon s'y enfonce. Laissez l'échantillon s'y enfoncer pour remplir le trou au lieu de le pousser.
· une fois la dernière goutte d'échantillon avec la tête liquide, le liquide se déplacera vers la deuxième jambe, augmentera lentement le mouvement du liquide, sortira du tampon
Comment faire un échantillonnage de colle vertical ?
· Trous verticaux pour l'échantillon de colle formés entre deux plaques de verre. Avec une colle très fine, la tête de la pipette ne peut même pas être insérée entre deux plaques de verre. Attention à la glycérine ! Placez la tête de la pipette sur le trou pour l'échantillon et celui-ci s'y enfoncera.
Avant de prélever l'échantillon, veillez à bien rincer le trou d'échantillonnage en gel de polypropylène-acyle. Éliminez l'acrylamide non polymérisé et l'eau qui pourraient se former au fond du trou. L'eau peut réduire considérablement la taille du trou. Utilisez une seringue de 25 ou 50 ml et une aiguille de calibre 18. Versez le tampon d'électrophorèse et rincez soigneusement le trou d'échantillonnage.
· Il peut être difficile de voir le trou d'échantillon, mais le reste est facile. En cas de trous excessifs, le tampon d'échantillon peut être testé au bleu de bromophénol.
Date de publication : 31 mars 2023